<< Page 1

  • 1. Cobas Ampliprep-Cobas  TaqManTM HIV-1 HPS
    เป็นการนำเทคโนโลยี Real-time RT-PCR มาใช้ในการตรวจจับจีโนมของไวรัส โดยเทคโนโลยีนี้ อาศัยการเพิ่มขยายสารพันธุกรรมของไวรัส แล้วตรวจจับสารพันธุกรรมที่เพิ่มขึ้นด้วย Hydrolysis (TagMan) probe ทำให้สามารถตรวจ viral loads ใน plasma ได้ในช่วง(linear range) ที่กว้างคือ 40-10,000,000 copies/mL โดยไม่ต้องเสียเวลาในการปั่นไวรัสให้ตกตะกอนก่อน ในกรณีที่ต้องการปรับค่า copies/mL เป็นหน่วย IU/ml สามารถกระทำได้โดยการคูณจำนวน copy ที่ได้ด้วย  1.7 (copies/mL x 1.7=IU/mL)

  • 2. Abbott RealTime assay
    เป็นชุดน้ำยาล่าสุด ที่องค์การอาหารและยาสหรัฐอเมริกาให้การรับรอง สามารถใช้กับเครื่องแยกสกัดสารพันธุกรรมอัตโนมัติ m2000sp และเครื่อง real-time PCR m2000rt  โดยการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของไวรัสด้วยเทคนิค RT-PCR และตรวจจับด้วย partially double-stranded linear probeแสดงผลแบบ real-time สามารถตรวจ viral loads ใน plasma ได้ในช่วง(linear range) ที่กว้างคือ 40-10,000,000 copies/mL ในกรณีที่ต้องการปรับค่า copies/mL เป็นหน่วย IU/ml สามารถกระทำได้โดยการคูณจำนวน copy ที่ได้ด้วย  1.7 (copies/mL x 1.7=IU/mL) และข้อดีของเทคโนโลยีนี้สำหรับการตรวจวัดปริมาณไวรัสเอชไอวีในกระแสเลือด คือสามารถใช้ได้กับเชื้อเอชไอวีที่มีความหลากหลายและความผันแปรของสายพันธุกรรม โดยมีการเพิ่มความไวของชุดตรวจโดยใช้ สายพันธุกรรมตั้งต้น (primer) และตัวติดตาม (probes) ที่มีความหลากหลายมากขึ้น สามารถตรวจได้หลายสายพันธุ์

  • 3. Versant RNA 3.0 assay (Branched DNA)
    อาศัยเทคโนโลยีของ Branched DNA (bDNA) ที่ใช้ oligonucleotide probe จำนวนมากกว่า 70 probes เข้าตรวจจับจีโนมของไวรัส เทคนิค bDNA นี้ไม่มีการเพิ่มจำนวนสารพันธุกรรม (DNA amplification) แต่มีการเพิ่มขยายสัญญาณส่วนที่ตรวจจับจีโนมไวรัส (Signal amplification detection) ทำให้ไม่มีปัญหาผลบวกปลอม (false positive) ซึ่งเกิดจากการปนเปื้อนหรือฟุ้งกระจายของ amplicon (carry over contamination) อย่างไรก็ตามเมื่อไม่มีขั้นตอนการเพิ่มจำนวนจีโนมของไวรัส ทำให้จำเป็นต้องใช้ปริมาณ plasma ถึง 1 mL พร้อมกับปั่นด้วยเครื่องปั่นเหวี่ยงความเร็วสูงเพื่อตกตะกอนไวรัสก่อนดำเนินปฏิกริยา สามารถตรวจ viral loads ใน plasma ได้ในช่วง(linear range) ที 500,000 copies/mL วิธีนี้สามารถตรวจจับไวรัสเอชไอวีชนิดที่ 1 (HIV-1) ได้ทุก subtype ตั้งแต่ A-H strain

  • 4. NucliSens EasyQ assay
    เทคโนโลยีนี้อาศัยเทคนิคการเพิ่มจำนวนของเชื้อไวรัสแบบ Nucleic acid sequence based amplification (NASBA) โดย Real-time NASBA สามารถเพิ่มปริมาณ RNA ณ อุณหภูมิเดียวตลอดทุกขั้นตอน (Isothermal-based method) ที่ 41oC โดยใช้ oligonucleotide primer และเอ็นไซม์ 3 ชนิด คือ AMV reverse transcriptase, T7 RNA polymerase, และ RNAse H  ดำเนินปฏิกริยาในหลอดเดียวกัน  Amplified product ที่เพิ่มขึ้นในปฏิกริยาจะถูกตรวจจับด้วย Molecular beacon probe แบบ real-time NASBA ซึ่งเป็นเทคนิคที่มีความไว (sensitivity) สูงถึง 12.5 copies/mL จึงเรียกว่า Supersens Nucleic Sens Easy Q viral load วิธีนี้สามารถวัดปริมาณไวรัสและแสดงผลเป็น IU/mLตามมาตราของ WHO ได้ที่ 12.5-3,000,000 IU/mL

​<< Page 1

 
ภาควิชาพยาธิวิทยา  Patho.mahidol.ac.th
อาคาร 1 ชั้น 4 คณะแพทยศาสตร์โรงพยาบาลรามาธิบดี มหาวิทยาลัยมหิดล
270 ถนนพระรามที่ 6 แขวงทุ่งพญาไท เขตราชเทวี กรุงเทพมหานคร 10400
โทรศัพท์ 02-201-1432 , 02-201-1436  E-mail : pathorama@hotmail.co.th